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原文传递一种针对巯基多肽生物样本的前处理方法以及对该生物样本的检测方法

专利名称：	一种针对巯基多肽生物样本的前处理方法以及对该生物样本的检测方法
摘要：	本发明公开了一种针对巯基多肽生物样本的前处理方法。该方法包括将巯基多肽进行烷基化，同时还对血样进行SSA蛋白沉淀。前处理无需预先分离血浆/血清，在采集血样后室温条件下即可完成反应，可及时锁定巯基多肽的真实水平。巯基多肽经过烷基化后，能够大大提高质谱的离子化效率，从而提升检测的灵敏度，另外还可以提高巯基多肽的稳定性，避免受到其他氧化剂的影响。血样经过SSA蛋白沉淀后，杂质残留少，干扰少，色谱峰型好。使用同位素内标法定量巯基多肽，可以降低基质效应和人为操作误差带来的影响，结果更准确。质谱检测方法准确度和精密度更高。本发明还公开了一种对前处理后的巯基多肽生物样本的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳健科医学检验实验室
发明人：	张良滔;陈婉婷;饶琳;田瑶林
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910677808.6
公开号：	CN110221006A
代理机构：	深圳市广诺专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	伍华荣
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	518000 广东省深圳市宝安区新安街道兴东社区67区中粮创智厂区7栋负101
主权项：	1.一种针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述方法包括：步骤01、制备巯基烷化剂，装入到若干EP管中备用；步骤02、分别在步骤01中的各个EP管中加入不同浓度的巯基多肽物质标曲工作液和待测样品；步骤03、分别在步骤02的各个EP管中加入巯基多肽物质内标工作液，充分混匀后在室温中静置；步骤04、分别在步骤03的各个EP管中加入SSA蛋白沉淀剂，涡旋混匀，离心处理；步骤05、从步骤04的各个EP管中取出上清液，加入到装有超纯水的EP管中，涡旋混匀；步骤06、从步骤05各管中取出混合液，分别加入装有超纯水的EP管中，涡旋混匀，转移到96孔板中，封膜待测。 2.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述步骤01中的巯基烷化剂包括N-R基顺丁烯二酰亚胺。 3.根据权利要求2所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述N-R基顺丁烯二酰亚胺为N-甲基顺丁烯二酰亚胺，N-乙基顺丁烯二酰亚胺，N-苄基顺丁烯二酰亚胺中的一种或几种。 4.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述步骤01中制备巯基烷化剂包括：步骤11、准确称取100.1mg的N-乙基顺丁烯二酰亚胺，和59.6mg的乙二胺四乙酸二钠；步骤12、将步骤11中称取的N-乙基顺丁烯二酰亚胺和乙二胺四乙酸二钠加入到40mL的超纯水中，震荡混匀2min，即得20mM的巯基烷化剂。 5.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述步骤03中充分混匀后需要在室温中静置15min。 6.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述步骤04中的SSA蛋白沉淀剂浓度为8％，离心处理条件：离心转速为15000rpm，温度为4摄氏度，离心时间为5min。 7.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述步骤05中上清液的体积为10μL，超纯水的体积为990μL。 8.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述步骤06具体为：从步骤05各管中取出10μL混合液，分别加入含有990μL超纯水的1.5mL EP管中，涡旋混匀，转移200μL到96孔板中，封膜待测。 9.根据权利要求1所述的针对巯基多肽生物样本的前处理方法，其特征在于，所述待测样品用EDTA抗凝管采集健康人全血后上下颠倒混匀；所述待测样品为抗凝全血、血清、血浆或者唾液中一种。 10.一种对前处理后的巯基多肽生物样本的检测方法，其特征在于，所述方法包括：步骤01、将待测样品和标曲工作液按照权利要求1-9中任意一项所述的前处理方法进行处理；步骤02、设置前处理后的标曲工作液为对照组；步骤03、对前处理后的样品和前处理后的标曲工作液用液相色谱串联质谱仪进行检测；所述液相色谱串联质谱仪的检测条件包括：色谱柱为C18柱，进样量10μL，乙腈溶液为流动相B，甲酸铵和甲酸的混合溶液为流动相A，采用多反应监测模式进行检测。
所属类别：	发明专利