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原文传递一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒

专利名称：	一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒
摘要：	本发明提供一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸(α‑十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3‑二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸)的分析试剂盒，具体内容包括替代基质的预处理，干血斑样本的处理等。本方法灵敏度较高，用时较短，提高了检测效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海可力梅塔生物医药科技有限公司
发明人：	朱监宝;官培龙;邱碧涵;于嘉屏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910526603.8
公开号：	CN110146627A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	肖明芳
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	200433 上海市杨浦区翔殷路128号11号楼D座3楼312室
主权项：	1.一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的4种游离脂肪酸分别为：α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸；所述的分析试剂盒包括如下试剂： (1)标准品溶液：含有α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸的甲醇、人造兔血溶液； (2)质控品溶液：含有α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸的甲醇、人造兔血溶液； (3)含有内标的提取液：含有十八碳三烯酸-13C18，二十碳五烯酸-d5，二十二碳六烯酸-d5的甲醇溶液； (4)衍生剂：衍生剂1：10％v/v乙酰氯的二氯甲烷溶液；衍生剂2：1％v/v三吡啶甲基胺的乙腈溶液； (5)复溶液：饱和一元醇； (6)流动相添加剂A：为饱和一元羧酸； (7)流动相添加剂B：为C1-C3胺化合物。 2.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括：96孔反应板和说明书。 3.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的标准品为含有α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸的甲醇、人造兔血溶液，具体浓度见表1，表1 4种游离脂肪酸标准品对应的浓度(μM) 脂肪酸 J1 J2 J3 J4 J5 J6 J7 α-十八碳三烯酸 200 100 40 20 10 4 2 二十碳五烯酸 20 10 4 2 1 0.4 0.2 ω3-二十二碳五烯酸 50 25 10 5 2.5 1 0.5 二十二碳六烯酸 200 100 40 20 10 4 2 。 4.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的质控品为含有α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸的甲醇、人造兔血溶液，分高、低两个浓度，分别为QCH、QCL；其中QCH、QCL中4种游离脂肪酸质控品对应的浓度见表2：表2 4种游离脂肪酸质控品对应的浓度(μM) 脂肪酸 QCL QCH α-十八碳三烯酸 12 120 二十碳五烯酸 1.2 12 ω3-二十二碳五烯酸 3 30 二十二碳六烯酸 12 120 。 5.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的含有内标的提取液为含有200nM十八碳三烯酸-13C18、200nM二十碳五烯酸-d5、200nM二十二碳六烯酸-d5的甲醇溶液。 6.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的流动相添加剂B为甲酸胺。 7.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述的复溶液为乙醇。 8.根据权利要求1所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述饱和一元羧酸为甲酸、乙酸、丙酸或丁酸中的任意一个或几个的组合物。 9.根据权利要求8所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述饱和一元羧酸为甲酸和乙酸中的任意一个或两者的组合物。 10.根据权利要求8或9所述的高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，其特征在于，所述饱和一元羧酸为甲酸。 11.权利要求1～10中任意一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于： (1)标准品：浓度为J1标准品的制备：分别取50mMα-十八碳三烯酸160μL、100mM二十碳五烯酸8μL、100mMω3-二十二碳五烯酸20μL、50mM二十二碳六烯酸160μL，分别加入1652μL的甲醇，制备4μM的α-十八碳三烯酸、0.4μM的二十碳五烯酸、1μM的ω3-二十二碳五烯酸和4μM的二十二碳六烯酸；再取4μM的α-十八碳三烯酸、0.4μM的二十碳五烯酸、1μM的ω3-二十二碳五烯酸和4μM的二十二碳六烯酸各150μL，用人造兔血定容至3000μL，即得浓度为J1标准品；浓度为J2标准品的制备：取浓度为J1的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各500μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为J2标准品；浓度为J3标准品的制备：取浓度为J1的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各200μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为J3标准品；浓度为J4标准品的制备：取浓度为J1的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各150μL，用人造兔血定容至1500μL，即得浓度为J4标准品；浓度为J5标准品的制备：取浓度为J2的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各100μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为J5标准品；浓度为J6标准品的制备：取浓度为J3的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各100μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为J6标准品；浓度为J7标准品的制备：取浓度为J4的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各100μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为J7标准品； (2)质控品：浓度为QCH标准品的制备：取浓度为J1的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各600μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为QCH标准品；浓度为QCL标准品的制备：取浓度为J4的α-十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、ω3-二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸各600μL，用人造兔血定容至1000μL，即得浓度为QCL标准品； (3)含有内标的提取液：；分别取20μM氘代同位素内标物450μL，包括十碳三烯八酸-13C18，二十碳五烯酸-d5，二十二碳六烯酸-d5，加入45mL甲醇配置得到浓度均为200nM的混合内标； (4)衍生剂：衍生剂1：配置10％v/v乙酰氯的二氯甲烷溶液；衍生剂2：配置1％v/v三吡啶甲基胺的乙腈溶液； (5)复溶液：饱和一元醇； (6)流动相添加剂A：饱和一元羧酸； (7)流动相添加剂B：C1-C3胺化合物。 12.权利要求1～10中任意一项所述的试剂盒在利用高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸中的应用。
所属类别：	发明专利