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原文传递一种叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法

专利名称：	一种叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法
摘要：	本发明提供了一种叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法，包括：叶绿素和脯氨酸的提取：将叶片剪碎放于95％乙醇中避光浸泡12h～72h,纱布过滤得滤液；叶绿素含量的测定：取提取液用95％乙醇稀释N倍,混匀，倒入比色皿内，以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm和470nm下测定吸光度；脯氨酸含量的测定：将所得的提取液，加冰乙酸和酸性茚三酮溶液，于沸水浴中加热，冷却后在波长508nm下比色，并从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，并计算脯氨酸含量的百分数。该方法一次性提取叶绿素和脯氨酸，且避免了研磨，大大减少了人力物力，节省了试验材料，对植物抗逆性研究具有重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	长江大学
发明人：	朱进;彭玉全;李文静
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910362658.X
公开号：	CN110160973A
代理机构：	武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	黄君军
分类号：	G01N21/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	434023 湖北省荆州市南环路1号
主权项：	1.一种叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1、叶绿素和脯氨酸的提取：将叶片剪碎放于95％乙醇中避光浸泡12h～72h,纱布过滤得滤液即为叶绿素和脯氨酸的提取液；步骤2、叶绿素含量的测定：取步骤1所得的提取液用95％乙醇稀释N倍,混匀，倒入比色皿内，以95％乙醇为空白对照，在波长665nm、649nm和470nm下测定吸光度，根据吸光度值确定叶绿素浓度及含量；步骤3、脯氨酸含量的测定： S1、标准曲线的制作； S2、将步骤1所得的提取液，加冰乙酸和酸性茚三酮溶液，于沸水浴中加热，冷却后在波长508nm下比色，并从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，并计算脯氨酸含量的百分数。 2.如权利要求1所述的叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法，其特征在于，所述步骤1中叶片的重量与95％乙醇的体积的比值为2g：5mL。 3.根据权利要求1所述的缺血修饰白蛋白测定方法，其特征在于，所述步骤2中根据所测得的吸光度值，用下述计算公式确定叶绿素浓度及含量：叶绿素a浓度：Ca＝13.95A665－6.8A649 叶绿素b浓度：Cb＝24.96A649－7.32A665 类胡萝卜素浓度：求得色素的浓度后再按下式计算组织中各色素的含量，其单位以mg/L鲜质量或干质量表示：式中：C为色素含量，单位为mg/L；V为提取液体积，单位为mL；N为稀释倍数；W为样品鲜质量或干质量，单位为g。 4.如权利要求1所述的叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法，其特征在于，所述步骤3中标准曲线制作的具体步骤为：取7支试管分别加入脯氨酸标准溶液0、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL，并用水均补齐至2mL，并分别加入2mL冰乙酸+2mL酸性茚三酮溶液混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热30min，取出冷却后在波长508nm下比色；并以1mL水+1mL冰乙酸+1mL酸性茚三酮溶液为对照，在波长508nm下比色；以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。 5.如权利要求1所述的叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法，其特征在于，所述步骤3中所述提取液、冰乙酸、酸性茚三酮溶液的体积比为1：1：1；对照组中95％乙醇、冰乙酸、酸性茚三酮溶液的体积比为1：1：1。 6.如权利要求1所述的叶绿素含量和脯氨酸含量的联合测定方法，其特征在于，所述步骤3中按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数： C-提取液中脯氨酸浓度，由标准曲线求得； V-提取液总体积，单位为mL； a-测定时所吸取得体积，单位为mL； W-样品重，单位为g。
所属类别：	发明专利