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原文传递一种基于睡眠障碍出现原发性骨质疏松症患者血浆代谢组学分析方法

专利名称：	一种基于睡眠障碍出现原发性骨质疏松症患者血浆代谢组学分析方法
摘要：	本发明公开了一种基于睡眠障碍出现原发性骨质疏松症患者血浆代谢组学分析方法，样品制备收集睡眠认知行为治疗睡眠障碍人群原发性骨质疏松症患者的血浆样本，经处理后准备进行超高效液相色谱‑质谱检测分析；睡眠障碍根据匹兹堡睡眠质量指数量表确定；超高效液相色谱‑质谱检测分析：将血清样本经色谱柱分离，并采用质谱检测分析；数据分析提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据，通过正交偏最小二乘判别分析和配对样本T检验对数据进行分析，获得两组之间的差异性代谢物，并对这些物质结合已有文献报道进行初步鉴定和验证。本发明睡眠障碍人群出现原发性骨质疏松症患者的早期预测和预后提供有利的技术支持。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	新疆;65
申请人：	新疆医科大学第二附属医院
发明人：	李国华;王帆;李慧;刘彦隆;王莲鹏;康毅敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910724454.6
公开号：	CN110308227A
代理机构：	北京华仁联合知识产权代理有限公司
代理人：	周明新
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	830063 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市水磨沟区南湖东路38号
主权项：	1.一种基于睡眠障碍出现原发性骨质疏松症患者血浆代谢组学分析方法，其特征在于：以下步骤： S1：样品制备收集睡眠认知行为治疗睡眠障碍人群原发性骨质疏松症患者的血浆样本，经处理后准备进行超高效液相色谱-质谱检测分析，睡眠障碍根据匹兹堡睡眠质量指数量表(Pittsburgh sleep quality index，PSQI)确定； S2：将所有被试开展睡眠认知行为治疗前后的100μl血浆与900μl丙-2-醇混合，涡旋超过10秒后超声处理10分钟，混合物-20℃冻存1小时，然后9500g离心10分钟，收集上层(800μl)并转移至上层，质量控制(QC)样品通过合并所有血清样品的等分试样代表分析中的血清样品，每5个样品中放置空白样品(丙-2-醇/水，9∶1v/v)和QC样品； S3：超高效液相色谱-质谱检测分析的仪器分析平台为UPLC-QTOF/MS(ACQUITY UPLCI-Class，Waters，Manchester，UK)，进行电喷雾电离四倍飞行时间质量光谱仪(XeVO G2-SQ-TOF，A Waters，Manchester，UK)，ACQUITY UPLC CSH色谱柱[1.7μm；50mm(长)×2.1mm(i.d.)]用于LC分离和色谱柱保持为55℃，流速为0.4毫升/分钟样品注射是2μl，进样量为4微升，保持自动进样器为4℃，初始线性梯度：40％B，0-2分钟40％B至43％B，2-2.1分钟：43％B至50％B，2.1-12分钟：50％B至54％B，12-12.1分钟：54％B至70％B，12.1-18分钟：70％B至99％B，18-18.1分钟：99％B至40％B，18.1-20分钟：40％B； S4：质谱条件正离子模式条件以氮气作为雾化、锥孔气体飞行检测模型，正负极毛细管电压为3kV模式，两种模式下的锥形电压均为25V，源设置为120℃，锥形气体流量为50升/h，去溶剂化温度设定为450℃，850升/小时的去溶剂化气体流量，亮氨酸脑啡肽(Waters Co.，Manchester，UK)被用作锁定质量参考离子，m/z 556.2771正模式和负模式下m/z554.2615，锁定喷雾以5μl/分钟的速率校准数据，使用两次斜碰撞能量扫描的连续模式获取MSE数据，低能量模式，扫描范围50-2000Da，扫描时间0.2s，碰撞能量设置为6V，高能量模式，扫描范围50-2000Da，扫描时间0.2s，斜碰撞能量15-60伏； S5：收集血浆样本，处理后经色谱柱分离，并采用质谱检测分析，在进行检测分析后提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据，采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)和配对样本T检验对数据进行分析，其中OPLS-DA按照OPLS的VIP值挖掘差异代谢物，得到睡眠认知行为治疗前后有差异的脂质分子，通过交叉比较，得到共有差异脂质分子，再对共有脂质分子与睡眠障碍人群出现原发性骨质疏松症患者的骨密度值(T、Z)和睡眠障碍量表分数做相关分析，通过分析相关性结果与临床症状的病理吻合性进行验证，得到代谢异常预测脂质分子。 2.根据权利要求1所述的一种基于睡眠障碍出现原发性骨质疏松症患者血浆代谢组学分析方法，其特征在于：所述超高效液相色谱-质谱检测分析：将血清样本经色谱柱分离，并采用质谱检测分析。 3.根据权利要求1所述的一种基于睡眠障碍出现原发性骨质疏松症患者血浆代谢组学分析方法，其特征在于：所述S3中色谱分离条件为：柱温为40℃流速为0.4毫升/分钟；流动相A组成，0.1％甲酸/10mM甲酸铵中乙腈/水；流动相B组成，B为0.1％甲酸酸/10mM甲酸铵在丙-2-醇/乙腈(9∶1v/v)中的溶液；梯度洗脱。
所属类别：	发明专利