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一种人外周血淋巴细胞的检测方法
| 专利名称： | 一种人外周血淋巴细胞的检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种人外周血淋巴细胞的检测方法。本发明取人抗凝外周血，分别加入抗人CD3、CD4、CD8、CD45单克隆抗体，以及抗人CD3、CD56、CD16、CD45单克隆抗体，然后再加入包含荧光探针的溶血素工作液，从而分别获得人外周血T淋巴细胞亚群和NK淋巴细胞亚群百分比和绝对计数值，实现对人外周血淋巴细胞的检测。本发明具有操作简便，样本稳定保存时间长，精确度高，多指标输出等优点。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 |
| 发明人： | 何淼;李国平;张涛 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-07-24T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-22T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910671950.X |
| 公开号： | CN110487706A |
| 代理机构： | 浙江千克知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 李欣玮 |
| 分类号： | G01N15/14(2006.01);G;G01;G01N;G01N15 |
| 申请人地址： | 315000 浙江省宁波市江北区慈城镇庆丰路777弄11#-2-1 |
| 主权项： | 1.一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)T淋巴细胞亚群检测： 取人抗凝外周血加入流式管底部，加入抗人CD3、CD4、CD8、CD45单克隆抗体，涡旋混匀，室温下避光孵育；然后进一步加入包含荧光探针的溶血素工作液，涡旋混匀，室温下避光孵育；最后使用流式细胞仪进行检测，获得人外周血T淋巴细胞亚群百分比和绝对计数值； (2)NK淋巴细胞亚群检测： 取人抗凝外周血加入流式管底部，加入抗人CD3、CD56、CD16、CD45单克隆抗体，涡旋混匀，室温下避光孵育；然后进一步加入包含荧光探针的溶血素工作液，涡旋混匀，室温下避光孵育；最后使用流式细胞仪进行检测，获得人外周血NK淋巴细胞亚群百分比和绝对计数值。 2.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)的荧光探针为线粒体荧光探针；优选的，所述荧光探针为线粒体绿色荧光探针。 3.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)的荧光探针为溶酶体荧光探针；优选的，所述荧光探针为溶酶体绿色荧光探针。 4.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述单克隆抗体与荧光探针的体积比为5:1～10:1。 5.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述溶血素工作液包含氯化铵、碳酸氢钾、EDTA二钠和胎牛血清(FBS)。 6.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，每升所述溶血素工作液包含氯化铵75～85g、碳酸氢钾15～25g、EDTA二钠300～400mg、胎牛血清(FBS)15～30ml。 7.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述溶血素工作液中荧光探针的体积浓度为2％～5％。 8.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，人抗凝外周血与溶血素工作液的体积比为1:10～1:5。 9.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述避光孵育时间为15-60分钟。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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