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原文传递一种测定血液中NNK及其代谢产物含量与预测NNK暴露风险的方法

专利名称：	一种测定血液中NNK及其代谢产物含量与预测NNK暴露风险的方法
摘要：	本发明属于检测分析技术领域，具体涉及一种测定血液中NNK及其代谢产物含量与预测NNK暴露风险的方法。本发明的预测NNK暴露风险的方法包括以下步骤：首先测定NNK暴露动物的血液中NNK及其代谢产物的含量，然后利用血液中NNK及其代谢产物的含量来确定NNK的α‑羟基化系数，从而评估NNK暴露后在不同个体内的α‑羟基化反应程度。本发明利用了α‑羟基化系数和间接产物含量的双重指标来反映NNK在机体内的α‑羟基化反应程度，评估结果准确、可靠，具有可比性等优势，建立了一种新的可用于评估NNK早期暴露风险的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	中国烟草总公司郑州烟草研究院
发明人：	毛健;孙世豪;马骥;崔凯;宗永立;张建勋;张启东;刘俊辉;柴国璧;卢斌斌;李鹏;王丁众;张文娟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910295476.5
公开号：	CN109991354A
代理机构：	郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：	张兵兵
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新区枫杨街2号
主权项：	1.一种预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将NNK暴露动物的血液样品进行离心分离，取上清液与内标物、乙腈混合均匀，然后离心分离，取上清液检测NNK及其代谢产物含量； (2)根据暴露后不同时间的动物血液样品中NNK及其代谢产物的含量相对于时间制作浓度-时间曲线，并计算AUC值，然后计算NNK的α-羟基化系数，根据α-羟基化系数预测NNK暴露风险。 2.根据权利要求1所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，所述代谢产物为HPB、PBD、HPBA和OPBA。 3.根据权利要求1所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，步骤(1)所述检测NNK及其代谢产物含量的检测方法为采用UHPLC-Q Exactive测定暴露后不同时间的血液样品中NNK及其代谢产物的含量。 4.根据权利要求3所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，所述UHPLC-QExactive的色谱条件为：色谱柱为HILIC柱；柱温：25℃；进样量5μL，流速0.5mL/min；流动相包括A相和B相，A相为10mmol/mL甲酸铵溶液，B相为乙腈；洗脱梯度：0～2min内B相的体积分数由95％下降至85％，2～6min内由85％降至75％，于0.1min内升至95％，维持2min；质谱条件为：加热喷雾离子源，正离子模式，喷雾电压3.5kV；鞘气流速为9.9L/min，辅助气流速为3.3L/min，毛细管加热温度为320℃，加热器温度为300℃；扫描模式采用Full MS/ddMS2，一级全扫描分辨率为70000，范围为100～300m/z，自动增益控制为1e6，离子最大注入时间为50ms；二级扫描为数据依赖扫描，分辨率为17500，自动增益控制为1e5，最大注入时间为50ms，归一化的碰撞能量为35％。 5.根据权利要求1所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，所述α-羟基化系数为NNK代谢产物的AUC之和与NNK及NNAL的AUC之和的比值。 6.根据权利要求1所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，还包括以下步骤：检测NNK暴露动物肝脏组织中O6-mG含量，根据α-羟基化系数和O6-mG含量预测NNK暴露风险。 7.根据权利要求6所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，所述检测NNK暴露动物肝脏组织中O6-mG含量包括以下步骤： 1)提取肝脏组织中的DNA，然后水解，与内标物混合均匀然后固液分离； 2)将步骤1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品； 3)将步骤2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用UHPLC-QExactive测试分析O6-mG含量。 8.根据权利要求7所述的预测NNK暴露风险的方法，其特征在于，步骤3)所述采用UHPLC-Q Exactive测试分析时色谱的条件为：谱柱为C18柱；柱温50℃；流动相A为体积分数为0.01％甲酸水溶液，流动相B为乙腈，二者体积比为30：70；等度洗脱，流速0.20mL/min；进样量10μL。 9.一种测定血液中NNK及其代谢产物含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：将血液样品进行离心分离，取上清液与内标物、乙腈混合均匀，然后离心分离，取上清液检测NNK及其代谢产物含量。
所属类别：	发明专利