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原文传递一种金属离子-QLISA免疫检测信号放大试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种金属离子-QLISA免疫检测信号放大试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明提供了一种金属离子‑QLISA免疫检测信号放大试剂盒及其制备方法，属于体外诊断检测技术领域，所述试剂盒包括以下组分：包被第一反应抗体的检测板、羧基包覆水溶性量子点标记的第二反应抗体、偶联抗体、稀释液、标准品溶液和洗涤液；所述水溶性量子点标记的第二反应抗体中包括二价金属离子和三价金属离子。本发明提供的金属离子QLISA免疫检测信号放大试剂盒检测荧光可增强到2.5～4倍，灵敏度可增强到2～4倍；具有检测范围广且检测结果稳定准确的特点。
专利类型：	发明专利
申请人：	河南大学
发明人：	吴瑞丽;王盼盼;李金洁;吕雁冰;申怀彬;李林松
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T06:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN202010010355.4
公开号：	CN111157743A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	董大媛
分类号：	G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543
申请人地址：	475001 河南省开封市明伦街85号
主权项：	1.一种金属离子-QLISA免疫检测信号放大试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被第一反应抗体的检测板、羧基包覆水溶性量子点标记的第二反应抗体、稀释液、标准品溶液和洗涤液；所述水溶性量子点标记的第二反应抗体中包括二价金属离子或三价金属离子。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述羧基包覆水溶性量子点标记的第二反应抗体中的水溶性量子点选自CdSe/ZnS、ZnCdSeS/ZnS、ZnxCd1-xSe、ZnSe、CuInZnS、InP、Cu或Mn掺杂的ZnSe量子点中的一种；所述水溶性量子点的发射波长范围为400～800nm。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述羧基包覆水溶性量子点标记的第二反应抗体中的羧基包覆水溶性量子点包括二氧化硅包覆的量子点QDs@SiO2，两亲性聚合物包覆的量子点QDs@PMAH或3-巯基丙酸修饰的量子点QDs@MPA。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述水溶性量子点标记的第二反应抗体中金属离子包括Ca2+、Mg2+、Ba2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+和Al3+中的一种或几种；金属离子在水溶性量子点标记的第二反应抗体中的浓度为5×10-7～3×10-5mol/mL。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述水溶性量子点标记的第二反应抗体中第二反应抗体的浓度为330～1000μg/mL，所述检测板上第一反应抗体的包被浓度为1～20μg/mL。 6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液为含25％～35％(体积比)新生牛血清的8×10-6～1.2×10-5mol/mL的磷酸盐缓冲液，所述稀释液的pH值为7.2～7.5，用于稀释样品、标准品和量子点标记的第二反应抗体；所述洗涤液为含(体积比)0.04％～0.06％吐温20的8×10-6～1.2×10-5mol/mL的磷酸盐缓冲液，所述洗涤液的pH值为7.2～7.5。 7.权利要求1～6任意一项所述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：将第一反应抗体与包被液混合后，包被检测板，弃去液体、洗涤、封闭后获得包被第一反应抗体的检测板；将表面包覆羧基的水溶性量子点活化、与第二反应抗体偶联后，与金属离子混合获得羧基包覆水溶性量子点标记的第二反应抗体；将所述包被第一反应抗体的检测板、羧基包覆水溶性量子点标记的第二反应抗体、稀释液、标准品溶液和洗涤液组装获得试剂盒。 8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述表面包覆羧基的水溶性量子点活化为将含表面包覆羧基的水溶性量子点的BS溶液、含S-NHS的BS溶液和含EDC的MES溶液按照体积比(16～18):1:1混合，超声处理、固液分离；收集固相组分为活化后的表面包覆羧基的水溶性量子点；所述表面包覆羧基的水溶性量子点的BS溶液中表面包覆羧基的水溶性量子点的浓度为0.4～0.45mg/mL；所述S-NHS的BS溶液中S-NHS的浓度为40～60mg/mL；所述EDC的MES溶液中EDC的浓度为15～20mg/mL。 9.权利要求1～6任意一项所述试剂盒在检测蛋白质中的应用。
所属类别：	发明专利