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原文传递基于二硫化铼纳米片构建三型胶原蛋白光电化学传感器的方法及应用

专利名称：	基于二硫化铼纳米片构建三型胶原蛋白光电化学传感器的方法及应用
摘要：	本发明公开了一种基于二硫化铼纳米片构建三型胶原蛋白光电化学传感器的方法及应用，首先制备了1‑丁基‑3‑十二烷基咪唑溴盐离子液体，然后以该离子液体为辅助试剂，借助探针超声剥离成功制备了二硫化铼二维片层纳米材料，并基于该二硫化铼纳米片修饰电极，负载三型胶原蛋白抗体，构建三型胶原蛋白光电化学传感器，并以白光为激发光源实现了三型胶原蛋白的特异性检测。本发明采用离子液体作为剥离剂插入或附着到二硫化铼的纳米片层结构中，从而可有效避免二硫化铼纳米片团聚，提高了其剥离效率，且二硫化铼属于直接带隙材料，相较于其他过渡金属二硫化物具有更好的光电性能，基于此实现了三型胶原蛋白的高选择性、高灵敏度分析。
专利类型：	发明专利
申请人：	温州医科大学
发明人：	孙东;黄雅娇;张锦涛
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T18:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911310355.X
公开号：	CN111060568A
代理机构：	武汉松涛知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	戴宝松
分类号：	G01N27/30;G01N27/327;G01N21/63;B82Y15/00;B82Y30/00;B82Y40/00;G;B;G01;B82;G01N;B82Y;G01N27;G01N21;B82Y15;B82Y30;B82Y40;G01N27/30;G01N27/327;G01N21/63;B82Y15/00;B82Y30/00;B82Y40/00
申请人地址：	325035 浙江省温州市温州茶山高教园区温州医科大学
主权项：	1.一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，步骤如下：将1-丁基-3-十二烷基咪唑溴盐溶于N-甲基吡咯烷酮中，再向其中加入ReS2粉末，用探针超声机超声处理，得到分散有ReS2纳米片的溶液，再经离心、洗涤、干燥，即得到ReS2纳米片。 2.根据权利要求1所述的一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，所述1-丁基-3-十二烷基咪唑溴盐的制备方法，包括如下步骤： (1)将氢化钠少量多次加入含咪唑的乙腈溶液中，冰浴下反应制得白色咪唑钠的乙腈悬浊液，冷却至室温备用； (2)向上述悬浊液中加入溴代十二烷，并于回流温度下搅拌过夜，待反应结束后抽滤，然后取滤液旋干溶剂得到粗产品，再经纯化处理后得到淡黄色油状液体十二烷基咪唑溴盐； (3)将步骤(2)得到的十二烷基咪唑溴盐、溴代正丁烷溶于乙腈中，并于回流温度下搅拌过夜，待反应结束后旋干溶剂得到粗产品，再经纯化后得到黄色粘稠油状液体1-丁基-3-十二烷基咪唑溴盐。 3.根据权利要求2所述的一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，所述氢化钠、咪唑、溴代十二烷的摩尔比为4:2:1。 4.根据权利要求2所述的一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述十二烷基咪唑溴盐、溴代正丁烷的摩尔用量比为1:1～3。 5.根据权利要求1所述的一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，所述1-丁基-3-十二烷基咪唑溴盐与ReS2粉末的用量比为2～8:1。 6.根据权利要求1所述的一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，所述探针超声处理时间为2～4h，功率为300W，超声机设置工作5s停顿2s。 7.根据权利要求1所述的一种基于离子液体辅助剥离的二硫化铼纳米片的制备方法，其特征在于，所述离心为先500rpm离心5min，再于12000rpm离心15min。 8.一种基于二硫化铼纳米片构建三型胶原蛋白光电化学传感器的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、玻碳电极预处理； S2、取6～12μL权利要求1～7任一项制备得到的ReS2纳米片分散液滴涂至步骤S1所得洁净的玻碳电极表面，室温下晾干，制得ReS2/GCE修饰电极； S3、在步骤S2制得的电极表面继续滴涂5～8μL的10μg/mL的三型胶原蛋白抗体溶液，室温晾干，用pH＝7.4的PBS缓冲溶液洗去未固定的抗体，得anti-Ⅲ-Col/ReS2/GCE修饰电极； S4、再将anti-Ⅲ-Col/ReS2/GCE修饰电极在戊二醛蒸汽中交联5min，用pH＝7.4的PBS缓冲溶液洗净，室温晾干； S5、将步骤S4制得的修饰电极置于0.25wt％牛血清白蛋白溶液中浸泡0.5h，以封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点，取出后用pH＝7.4的PBS缓冲溶液洗净，室温晾干，得anti-Ⅲ-Col(BSA)/ReS2/GCE修饰电极，即三型胶原蛋白光电化学传感器，放置于4℃冰箱中保存待用。 9.根据权利要求8所述方法制备的基于二硫化铼纳米片构建的三型胶原蛋白光电化学传感器在定性和/或定量检测三型胶原蛋白抗原中的应用。 10.根据权利要求9所述的基于二硫化铼纳米片构建的三型胶原蛋白光电化学传感器的应用，其特征在于，所述三型胶原蛋白抗原的检测方法包括如下步骤： a、标准溶液配制：配制一组包括空白标样在内的不同浓度的三型胶原蛋白抗原标准溶液； b、工作电极修饰：以权利要求7所述制备方法制得的光电化学传感器为工作电极，将工作电极置于步骤a中配制的不同浓度的三型胶原蛋白抗原标准溶液中进行孵育，制得Ⅲ-Col-anti-Ⅲ-Col(BSA)/ReS2/GCE修饰电极； c、工作曲线绘制：使用电化学工作站的三电极体系进行测试，将步骤b制得的Ⅲ-Col-anti-Ⅲ-Col(BSA)/ReS2/GCE修饰电极作为工作电极、铂片电极作为对电极、饱和甘汞电极作为参比电极，在以抗坏血酸的磷酸缓冲溶液作为支持电解质的溶液中进行测试；采用i-t测试手段，根据所得的光电流值与三型胶原蛋白抗原标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线； d、测试待测样品的光电流值，结合工作曲线，测算待测样品中三型胶原蛋白抗原的浓度。
所属类别：	发明专利