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原文传递一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒

专利名称：	一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒
摘要：	本发明提供一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，所述试剂盒包括p16INK4a校准品，p16INK4a抗体磁珠，吖啶酯标记葡聚糖多聚p16INK4a抗体，缓冲液，稀释缓冲液以及洗涤液。本发明提供的试剂盒采用化学发光检测技术，结合葡聚糖的信号放大吖啶酯的化学发光体系更有利于检测细胞样本中的p16INK4a抗原含量，具有非常高的灵敏度，与现有的p16INK4a化学发光检测相比抗体使用量更少，干扰更低，具有较大的临床推广价值。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏美克医学技术有限公司
发明人：	李文成;孙康俊;黄宝福
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T01:00:00+0805
申请号：	CN201911363176.2
公开号：	CN111089958A
代理机构：	上海盈盛知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	孙佳胤
分类号：	G01N33/543;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/543;G01N21/76
申请人地址：	211800 江苏省南京市浦口区高新技术开发区江北新区新锦湖路3-1号二期D栋3层
主权项：	1.一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括p16INK4a校准品，p16INK4a抗体磁珠，吖啶酯标记葡聚糖多聚p16INK4a抗体，缓冲液，稀释缓冲液以及洗涤液；所述吖啶酯标记葡聚糖多聚p16INK4a抗体的制备方法为： (1)葡聚糖活化：将葡聚糖溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入适量高碘酸钠进行氧化，用葡聚糖基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜； (2)吖啶酯活化：加入NHS旋涡混合，再加入EDC旋涡混合；摇床100-500r/min，30-37℃反应10-30min；其中NHS:EDC的质量浓度比为25:10； (3)偶联：离心后去除上清，加入超纯水，超声复溶，重复离心复溶，加入p16INK4a单克隆抗体和活化葡聚糖，旋涡混合，摇床100-500r/min，30-37℃反应1-3h； (4)封闭，洗涤，保存。 2.根据权利要求1所述一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述p16INK4a抗体磁珠的制备方法为： (1)免疫磁珠的活化：加入NHS旋涡混合，再加入EDC旋涡混合；摇床100-500r/min，30-37℃反应10-30min；其中NHS:EDC的质量浓度比为25:10； (2)偶联：离心后去除上清，再加入超纯水，超声复溶，重复离心复溶，加入p16INK4a单克隆抗体，旋涡混合，摇床100-500r/min，30-37℃反应1-3h；磁珠与抗体的标记比例为(50-150):1； (3)封闭，洗涤，保存。 3.根据权利要求2所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁珠粒径为100nm-5μm，表面修饰为羧基、羟基或链霉亲和素中的一种。 4.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品为用缓冲液将p16抗原配制成0-100pg/mL系列浓度的校准溶液系列。 5.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括缓冲体系、封闭试剂、阻断剂和防腐剂；所述缓冲体系包括PBS、Tris或CBS缓冲液中的任意一种，且浓度为10-50mmol/L，PH值为7.0-9.0；所述封闭试剂包括牛血清白蛋白或酪蛋白中的任意一种，且质量浓度为1-15％；所述阻断剂包括IgG蛋白，且质量浓度为0.1-1％；所述防腐剂包括叠氮钠或Proclin 300中的任意一种，且质量浓度为0.01-0.1％。 6.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述稀释缓冲液配方包括：10-50mmol/L Tris-HCl、0.1-5％酪蛋白、1--5％BSA、0.01-1％Proclin300、0.01％-1Tween 20、0.9％NaCl，缓冲液调pH至7.2-7.4。 7.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述洗涤液配方包括：10-50mmol/L的Tris-HCl、0.01-1％的Tween 20和0.9％的NaCl，缓冲液调pH至7.2-7.4。
所属类别：	发明专利