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原文传递一种基于葡聚糖信号放大ki67和p16INK4a检测试剂盒

专利名称：	一种基于葡聚糖信号放大ki67和p16INK4a检测试剂盒
摘要：	本发明公开一种基于葡聚糖信号放大ki67和p16INK4a检测试剂盒，所述试剂盒包括ki‑67葡聚糖多聚AP标记抗体、p16INK4a葡聚糖多聚HRP标记抗体、DAB显色液和AP显色液。本发明试剂盒采用酶标多聚一抗进行免疫检测，公开了葡聚糖多聚抗体制备的特定条件，同时以葡聚糖分子为支撑骨架，复合抗体和信号标记物形成葡聚糖多聚抗体，其携带大量的信号标记物极大的提高了信号强度，降低了抗体使用浓度、避免非特异信号干扰。同时，高分子复合物与酶是多位点结合，为酶的天然三维构象提供了稳定的支撑，大幅度维持了酶和抗体的稳定性，实现大分子之间的高效键合。本发明试剂盒极大的减少了抗体用量，减少了操作流程和时间，且具有更高的显色效率和检测灵敏度。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏美克医学技术有限公司
发明人：	李文成;汪骏青;孙康俊;黄宝福
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911364620.2
公开号：	CN111077302A
代理机构：	上海盈盛知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	孙佳胤
分类号：	G01N33/541;G01N33/535;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/541;G01N33/535
申请人地址：	211800 江苏省南京市浦口区高新技术开发区江北新区新锦湖路3-1号二期D栋3层
主权项：	1.一种基于葡聚糖信号放大ki-67和p16INK4a双染检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括ki-67葡聚糖多聚AP标记抗体、p16INK4a葡聚糖多聚HRP标记抗体、DAB显色液和AP显色液；所述ki-67葡聚糖多聚AP标记抗体制备方法为：将葡聚糖溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入适量高碘酸钠进行氧化，用葡聚糖基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜，水溶碱性磷酸酶，加入适量高碘酸钠氧化，使用乙二醇终止反应，透析过夜；将氧化葡聚糖和ki-67抗体和活化后碱性磷酸酶混合反应后，透析过夜，使用保存液稀释至工作液；所述p16INK4a葡聚糖多聚HRP标记抗体制备步骤为：将葡聚糖溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入适量高碘酸钠进行氧化，用葡聚糖基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜，水溶辣根过氧化物酶，加入适量高碘酸钠氧化，使用乙二醇终止反应，透析过夜；将氧化葡聚糖和p16INK4a抗体和活化后辣根过氧化物酶混合反应后，透析过夜，使用保存液稀释至工作液。 2.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大ki-67和p16INK4a双染检测试剂盒，其特征在于，所述葡聚糖分子量为400000-500000。 3.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大ki-67和p16INK4a双染检测试剂盒，其特征在于，所述葡聚糖多聚抗体保存液配方包括：PBS、Tris或HEPES缓冲液中的一种，以及1％-2％牛血清蛋白，0.01％-1％的Proclin300。 4.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大ki-67和p16INK4a双染检测试剂盒，其特征在于，所述DAB显色液组成为A液底物：H2O2；B液增强：NiCl2；C液色原：二氨基联苯胺。 5.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大ki-67和p16INK4a双染检测试剂盒，其特征在于，所述AP显色液组成为A液稀释：Tris缓冲液；B液底物：α-萘酚AS-BI磷酸盐；C液色原：品红。
所属类别：	发明专利